陆家海＃，张定梅＃，王国铃＃，郭中敏＃，李娟＃，谭炳炎，欧阳丽萍，凌文华，余新炳
中山大学，广州市 510080
钟南山
广州呼吸道疾病研究所，广州医学院，广州 510120
摘要 关于SARS冠状病毒（SARS-CoV）多聚酶（nsp5基因）的研究开展的不多，仅有的少量文献表明：有研究者认为SARS-CoV 多聚酶nsp-5基因是3CL pro，也有学者认为nsp2为3CL pro，为了确定nsp5基因表达蛋白在SARS-CoV生命周期中的功能，为研究抗SARS药物的靶标提供基础，开展了此项研究。
从广东省2003年4月份的SARS病人身上分离SARS-CoV，RT-PCR扩增多聚酶nsp5 基因，并构建nsp5基因的真核表达载体(pCI－neo)，经过酶切和测序鉴定后，转染到COS-7 细胞，获得了稳定分泌nsp5蛋白的细胞株，用SDS-PAGE 对蛋白进行了分析。用基因信息学分析了nsp5基因在SARS流行过程中的变异规律，同时利用生物信息学的方法预测了nsp5蛋白的二级结构，构建了蛋白质3D结构模型。成功从广东SARS病人分离的SARS-CoV中扩增了nsp5基因，经序列分析表明：nsp5基因在传播过程中是比较稳定的，和其它SARS－CoV株序列有较高的同源性。构建了真核表达载体(pCI-neo/nsp5)，获得了稳定表达SARS –CoV nsp5蛋白的细胞株。为研究nsp5基因表达蛋白的功能奠定了基础。用PSIPRED服务系统预测了 SARS冠状病毒nsp5 的二级结构，用3D-PSSM 蛋白折叠识别服务系统（Threading算法 ）构建了nsp5基因表达蛋白的3D 结构模型。SARS CoV nsp5在传播过程中保持高度稳定；SARS-CoV nsp5基因的真核表达载体和3D模型的成功构建，为进一步探索该蛋白的功能和抗SARS药物筛选奠定了基础。
关键词 严重急性呼吸综合症（SARS）; 严重急性呼吸综合症冠状病毒（SARS-CoV）; nsp5；非结构蛋白；3D结构
＃以上作者贡献等同
通讯作者：陆家海博士，中山大学公共卫生学院，广州，510080，中国 （Tel: 86-20-87330605; Fax: 86-20-87332438; Email: jiahailu@yahoo.com.cn）
本研究受广东省SARS专项研究基金资助（No. 2003Z3-E0461）